extraktion av silymarin
Silymarin, en blandning av flavonolignaner som uppvisar många farmakologiska aktiviteter, erhålls från frukterna av mjölktistel (Silybum marianum L. Gaertner). På grund av det höga lipidinnehållet i tistelfrukter rekommenderar European Pharmacopoeia en tvåstegsprocess för extraktion. Först avfettas frukterna i 6 timmar med n-hexan; för det andra extraheras silymarin med metanol i ytterligare 5 timmar.
De presenterade uppgifterna visar att denna extremt långa traditionella Soxhlet-extraktionsprocess kan förkortas till några minuter med hjälp av tryckvätskextraktion (PLE). PLE gör det också möjligt att eliminera det avfettningssteg som krävs i det traditionella förfarandet, vilket förenklar silymarin-extraktionsförfarandet och förhindrar silymarinförlust orsakad av avfettning. PLE-utvinningarna som erhållits under optimerade extraktionsförhållanden är klart bättre än de som erhållits genom det farmakopé-rekommenderade Soxhlet-extraktionsförfarandet.
PLE-utbytena av silychristin, silydianin, silybin A, silybin B, isosilybin A och isosilybin B i aceton är 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 respektive 1,5 mg / g av de icke avfettade frukterna. 5-timmars Soxhlet-extraktion med metanol på avfettade frukter ger endast ~ 72% av den silymarinmängd som erhållits under 10 min PLE vid 125 ° C.
Vad är Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, vanligtvis kalladmjölktistel, välsignad mjölktistel, Marian Thistle, Mary Thistle eller Saint Mary' s Thistle, är en årlig eller tvåårig växt från familjen Asteraceae. Växten, som ursprungligen växte i Sydeuropa och Asien, finns nu över hela världen (1). Denna besvärliga ogräs odlas för närvarande som en medicinalväxt och är en av de viktigaste läkemedelsgrödorna i Europa.
Mjölktistel har använts för medicinska ändamål i över 2000 år, oftast för behandling av leversjukdom (cirros och hepatit), samt för att skydda levern från giftiga ämnen (2–5). Nyare forskningsintresse för denna växt har stimulerats av studier som visar dess exceptionellt höga antitumöraktivitet. Extrakt från växten studeras nu intensivt i experimentell kemoförebyggande av cancer och i förbättring av kemoterapibiverkningar (6). Nya rapporter har visat att extrakt från denna växt också kännetecknas av många andra farmakologiska aktiviteter, såsom antiinflammatoriska och antifibrotiska effekter (2, 7, 8).
Silymarin, en blandning av flavonolignaner som uppvisar många farmakologiska aktiviteter, erhålls från frön av mjölktistel (Silybum marianum L. Gaertner). De vanliga procedurerna som hittills har använts för silymarin-extraktion baseras främst på långsamma högtemperaturlösnings-extraktionsmetoder. Nackdelarna med dessa tekniker har lett till sökandet efter nya alternativa extraktionsprocesser som dessutom kan förbättrasextrakt av silymarinkvalitet. Det senare är särskilt viktigt när det gäller silymarinapplikation. De erhållna silymarin-extrakten kan faktiskt innehålla giftiga organiska rester som måste avlägsnas för att tillgodose konsumenternas acceptans.
I försöket att förbättra processen med extraktion av silymarin och göra den mer effektiv och miljövänlig, nyligen mikrovågsassisterad lösningsmedelsextraktion, ultraljudassisterad lösningsmedelsextraktion, trycksatt vätskeextraktion, enzymassisterad extraktion, superkritisk vätextraktion, och särskilt subkritisk vattenextraktion även kända som tryckvarmtvattenuttagsmetoder har utvecklats och tillämpats.
Material och metoder
Växtmaterial
Torkad frukt av S. marianum L. Gaertner köptes från ett lokalt apotek (Lublin, Polen) hösten 2011. Ett tillräckligt stort representativt prov av växtmaterialet (ca. 500 g) maldes och siktades för att erhålla partikelstorleken 0,4 mm. Noggrant vägda delar av materialet användes för extraktion.
Material och reagenser
Det standardiserade torra extraktet av S. marianum L. Gaertner och silybin B (med en renhet av 98%), applicerat som standard, köptes från Sigma-Aldrich, Polen. Aceton, etylacetat, fosforsyra, n-hexan (alla av analytisk reagenskvalitet) och metanol (analytisk reagenskvalitet och HPLC-kvalitet) köptes från den polska kemiska anläggningen (POCh, Gliwice, Polen). Vatten renades med användning av ett Milli-Q-system från Millipore (Millipore, Bedford, MA, USA). Neutralglas, erhållet som en gåva från lokala glasverk (fraktion 0,4-0,6 mm), applicerades som ett dispergeringsmedel i PLE-cellen.
Extraktion av vätska under tryck
PLE utfördes med ett Dionex ASE200-instrument (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, USA). Växtmaterialet (0,5 g) blandades med inert material (neutralt glas) och placerades i en 22 ml extraktionscell av rostfritt stål innehållande filterpapper i botten. En annan cirkel med filterpapper placerades högst upp på extraktionscellen. Slutligen stängdes cellen tätt och placerades i uppvärmningsugnen.
Innehållet i cellen extraherades vid arbetstrycket 60 bar. Vid slutet av processen spolades det extraherade provet med användning av lösningsmedelsvolymen lika med 60% av extraktionscellens. Slutligen spolades provet i 60 s med applicering av trycksatt kväve (150 psi), och extraktet uppsamlades i en 60 ml glasflaska med ett teflonbelagt gummilock. Volymen av det uppsamlade extraktet var mellan 25 och 31 ml, beroende på packningstätheten för extraktionscellen. Det erhållna extraktet överfördes till en 50 ml mätkolv och fylldes till dess volym med användning av en lämplig lösningsmedelstyp. Tre oberoende extraktioner utfördes under samma betingelser. Mellan körningarna tvättades systemet med ett lämpligt extraktionslösningsmedel.
PLE-parametrar som studerades var lösningsmedelstyp (metanol, aceton och etylacetat), temperatur (50, 75, 100, 125 och 150 ° C), tid (5, 10, 15 och 20 min) och antalet extraktionscykler (1 –5). För PLE-avfettningsprocessen applicerades n-hexan som lösningsmedel och parametrar som studerades var temperatur (50 och 100 ° C) och tid (5 och 10 min) för lipidavlägsnande. Aceton- och etylacetatextrakt indunstades till torrhet under vakuum och återupplöstes i metanol före kromatografisk analys.
Soxhlet extraktion
Uttömmande extraktioner i Soxhlet-apparaten utfördes med användning av 2,0 g delar av materialet. Exakt vägda prover överfördes till en pappersfingerborg. Den laddade hylsan infördes i en 100 ml Soxhlet-extraktor. Extraktioner utfördes i tvåstegsprocessen (n=3). I det första steget i proceduren avfettades växtmaterialet under 6 timmar med 75 ml n-hexan. I det andra extraherades silymarin under 5 timmar med 75 ml metanol. Efter kylning till rumstemperatur överfördes det erhållna extraktet till en 100 ml mätkolv, som därefter fylldes upp till sin volym med metanol. Tre oberoende extraktioner utfördes.
Kromatografisk analys av extrakt
HPLC-mätningar utfördes på en Dionex Liquid Chromatograph (Dionex Corp.) bestående av en kromatografihölje (LC20) innehållande en PEEK-automatiserad injektionsventil utrustad med en 10 μL provslinga, en gradientpump (GP50), en absorbansdetektor (AD25) och en detektor för fotodiodmatris (PDA100). Hela det kromatografiska systemet var under kontroll av PeakNet6-datainsamlingssystemet. Kromatografiska separationer utfördes vid 40 ° C med användning av en Prodigy ODS-2-kolonn (5|im, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Mobil fas A var en blandning av metanol med vattenhaltig fosforsyralösning innehållande 0,5 ml 75% fosforsyra i 100 ml lösning (35: 65, volym / volym). Mobil fas B var en blandning av metanol med den vattenhaltiga fosforsyralösningen innehållande 0,5 ml 75% fosforsyra i 100 ml lösning (50: 50, volym / volym). Flödeshastigheten var 0,8 ml / min. Analyserna utfördes i en mobil fasgradient med andelen B i A som varierade enligt följande: initial koncentration, 0% B; 28 min, 100% B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Före nästa analys jämviktades kolonnen med användning av den mobila fasen innehållande 0% B under 20 minuter. Varje extrakt HPLC-analyserades tre gånger. Våglängden för detektering av flavonolignaner sattes till 288 nm och UV-Vis-spektra från 210 till 500 nm registrerades också för toppkarakterisering.
Den kvalitativa analysen av extrakten utfördes genom att jämföra topparnas retentionstider och deras UV-Vis-spektra i extrakten med avseende på de för det standardiserade torra silymarinprovet. För att bereda den standardiserade torra silymarinlösningen löstes en 0,02 g portion av provet innehållande 5,0 mg silybin A + B i 50 ml metanol. Topparna för silychristin, silydianin, silybin A, silybin B, isosilybin A och B uppträdde vid retentionstiderna 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 respektive 34,8 min. Kvantitativ analys baserades på silybin B-standard och extern standardmetod användes. En kalibreringskurva genererades från fem koncentrationer av föreningen i koncentrationsområdet 0,1-1,0 mg / ml. Tre mätningar av topparea för varje koncentration av standardlösning utfördes. De karakteristiska parametrarna för den erhållna kalibreringskurvan var som följer: lutning, 0,516 och avlyssning, 0,003. Kalibreringskurvan befanns vara linjär inom det testade koncentrationsområdet. Korrelationskoefficienten befanns vara> 0,995. På grund av svårigheten att köpa silychristin, silydianin, silybin A, isosilybin A och B standarder, beräknades mängderna av dessa föreningar genom att relatera deras kromatografiska svar till kalibreringskurvan för silybin B.
Statistisk analys
Alla data uttrycks som medelvärde ± standardavvikelse (SD). Variansanalysen (ANOVA) och F-testet användes för att bedöma påverkan av PLE-tillstånd på silymarinutbytet. Medelvärdena ansågs signifikant olika när resultatet av jämförda parametrar skilde sig åt på P=0,05 signifikansnivå. För att kontrollera betydelsen av varje Fisher-koefficient användes P-värden.
Resultat
Figur 1a visar typiskt kromatogram av PLE-extrakt erhållet från frukterna av S. marianum L. Gaertner, medan figur 1b visar kromatogrammet för silymarin-extraktion från beredd mjölktistellösning upplöst det standardiserade torra extraktet av S. marianum L. Gaertner i metanol (1 mg / ml). Analysen av kromatogram av PLE- eller Soxhlet-extrakt med den för standardiserad lösning (retentionstider, UV – Vis-spektra och topprenhetsindex) visade att de applicerade kromatografiska förhållandena möjliggör en tillräcklig upplösning av de undersökta föreningarna, toppar numrerade från 1 till 6, från provmatrixkomponenter. Topparna identifierades som: (1) silychristin, (2) silydianin, (3) silybin A, (4) silybin B, (5) isosilybin A respektive (6) isosilybin B.
Hur extraherar du mjölktistel?
Till skillnad från de flesta örter extraherar mjölktistelfrön inte så bra i vatten, så försök inte göra en kopp te av dem! Ät istället färskmalda frön eller få en kapsel av god kvalitet. Om du använder frön köper du dem hela och maler dem sedan efter behov (jag använder en kaffekvarn för att göra dem till ett grovt pulver). Fröna smakar fet, söt och bitter på en gång - kanske är de en förvärvad smak, men de är inte alls obehagliga. Börja med att ta 1/2 till 1 matsked per dag strö på maten och se hur det känns för dig, justera mängden efter behov.
Ingredienser
1 kopp ljummet vatten
1 kopp 100 bevis alkohol Jag använder vodka
¾ till 1 kopp mjölktistelfrön om möjligt
Instruktioner
Sterilisera Mason-burken som används genom att placera den i kokande vatten i cirka 10 minuter, eller genom att placera den på racket i ugnen vid cirka 250 grader i 15 minuter.
Häll alla ingredienserna i en Mason-burk.
Lägg ett nytt lock på burken och skruva fast det ordentligt med en ring.
Skaka burken kraftigt i cirka 1 minut.
Lägg burken på en sval mörk plats i fem veckor.
Skaka burken dagligen för att säkerställa att mjölktistelfrön inte flyter till toppen och fylls med alkohol och vatten helt.
Vid slutet av det angivna antalet veckor silar du bort mjölktisteln från vätskan genom en sil med fin nät - och håller vätskan. Om du inte har en sil med fint nät, använd en liten durkslag och / eller lägg en durkslag med flera kaffefilter för att minska öppningarna.
Hur länge tar mjölktisteln effekt?
Mjölktistelfrön kan skydda leverceller från giftiga kemikalier och läkemedel. Det verkar också ha blodsockersänkande, antioxidant och antiinflammatoriska effekter.
Förbättring av oxidativa stressparametrar noterades konsekvent vid sex månader' behandlingstid med ett specialiserat leveranssystem för mjölktistel (2). Förbättring av oxidativt stressmönster är ansvarig för förbättrad insulinsignalering och levercellens funktion.
Hur lång tid bör det ta mjölktistel? (Mjölktistel DOSERING)
Mjölktistel anses vara säkert i doser på 420 mg / dag oralt i uppdelade doser i upp till 41 månader. En källa föreslår dagliga doser av 12 till 15 g torra frukter för dyspepsi och störningar i gallsystemet, medan ett extrakt som innehåller 200 till 400 mg / dag silymarin anses vara effektivt vid olika leversjukdomar.
Fördelar med mjölktistel
1. Stödjer leverhälsan
En av de vanligaste användningarna av mjölktistel är att behandla leverproblem. En studie från 2016 visade att mjölktistel förbättrade dietinducerad leverskada hos möss. Mer bevis behövs för att bevisa att mjölktistel gynnar människoliv på samma sätt, men forskare teoretiserar att det gör det. Den aktiva ingrediensen i mjölktistel, silymarin, fungerar som en antioxidant genom att minska produktionen av fria radikaler. Forskare tror att detta skapar en avgiftande effekt, varför det är mjölktistel kan vara till nytta för leverproblem.
Tills mer forskning utförs rekommenderas dock inte mjölktistel som det primära behandlingsalternativet för leverproblem. Men det kan vara en bra kompletterande behandling att prova.
2. Främjar hudens hälsa
Mjölktistelolja kan användas lokalt för att förbättra hudens hälsa.
Mjölktistel kan hjälpa till att främja frisk hud. En studie från 2015 visade att mjölktistel bidrog till att förbättra inflammatoriska hudförhållanden när de applicerades på mössens hud.
Mjölktistel visade sig också ha antioxidant- och åldringseffekter på mänskliga hudceller i en laboratoriemiljö i en annan studie.
Ytterligare forskning på människor behövs för att identifiera vilka fördelar en person kan förvänta sig av att applicera mjölktistel på huden.
3. Minskar kolesterol
Högt kolesterol kan leda till problem med hjärthälsan och öka en persons risk för stroke.
En studie från 2006 tyder på att mjölktistel kan spela en viktig roll för att hålla kolesterolnivån nere. Det fann att kolesterolnivåerna var lägre hos personer som tog mjölktistel för att behandla diabetes än de som tog placebo.
4. Stöder viktminskning
Initial djurforskning som genomfördes 2016 visade att silymarin orsakade viktminskning hos möss som fick en diet som var avsedd att orsaka viktökning.
Detta antyder att mjölktistel kan vara till nytta för dem som vill gå ner i vikt. Mer forskning om effekterna av mjölktistel på viktminskning hos människor behövs för att bekräfta detta.
5. Minskar insulinresistens
En studie på möss fann att mjölktistelextrakt bidrog till att minska insulinresistensen. Insulinresistens är ett problem för personer med typ 2-diabetes.
Även om denna forskning tyder på att mjölktistel kan spela en roll i diabeteshantering, behövs mer forskning för att bekräfta om mjölktistel minskar insulinresistens och stöder diabeteshantering.
6. Förbättrar allergiska astmasymtom
Den aktiva ingrediensen i mjölktistel kan hjälpa till att minska inflammation. En studie från 2012 visade att silymarin hjälpte till att skydda mot inflammation i luftvägarna hos möss med allergisk astma.
Mer forskning behövs för att se om silymarin gynnar astmasymtom hos människor.
7. Begränsar spridningen av cancer
Mjölktistel kan hjälpa till att stoppa spridningen av vissa typer av cancer. En granskning 2016 visade att extrakt av mjölktistel hämmade tillväxten av cancerceller i kolorektal cancer.
Mer forskning behövs för att avgöra hur mjölktistel kan användas för att bekämpa cancer.
8. Stöder benhälsa
Mjölktistel kan hjälpa till att förhindra benförlust orsakad av brist på östrogen. Mjölktistel kan spela en viktig roll för att stödja benhälsan. En studie från 2013 visade att mjölktistel hjälpte till att förhindra benförlust. Studien tittade specifikt på benförlust orsakad av brist på östrogen. Det är ännu inte klart om mjölktistel är lika fördelaktig för benförlust med en annan orsak. Ytterligare studier behövs innan det är säkert att dra slutsatsen att mjölktistel stöder benhälsan hos människor.
9. Förbättrar kognition
En studie från 2015 visade att mjölktistel ökade motståndskraften mot oxidativ stress. Oxidativ stress är en potentiell orsak till Alzheimers sjukdom.
På detta sätt kan mjölktistel hjälpa till att förbättra kognitionen och behandla degenerativa tillstånd som påverkar sinnet. Mer forskning på människor behövs för att bekräfta effekterna av mjölktistel på kognitionen.
10. Ökar immunförsvaret
Mjölktistel kan hjälpa till att stärka en persons' s immunsvar och hjälpa dem att bekämpa infektioner.
En studie från 2016 på en djurmodell visade att extrakt av mjölktistel förbättrade immuniteten vid konsumtion. En äldre studie visade att extrakt av mjölktistel hade en positiv effekt på immunsvaret hos människor.
Fler studier med mänskliga deltagare behövs innan forskare med säkerhet kan säga att mjölktistel ökar en persons immunsystem.
Biverkningar av mjölktistel
Mjölktistel verkar ha få biverkningar, även om de tas i flera år. Vissa människor har illamående, diarré, klåda och uppblåsthet.
För bulk mjölktistelpulver, kontakta oss påherbext@undersun.com.cn
Referenser: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
